Fluorescensresonansenergiöverföring (FRET)
Fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) är en icke-strålande energiöverföringsprocess där givaren Excited State Energy överförs till Acceptor Excited State genom interaktion mellan intermolekylära elektriska par. Denna process involverar inte fotoner och är därför icke-strålande. Denna analys har fördelarna med att vara snabb, känslig och enkel.
Färgämnet som används i FRET -analysen kan vara identisk. Men i de flesta applikationer används faktiskt olika färgämnen. I korthet är överföringen av lysande resonansenergi överföringen av ett par dipoler från givaren (färgämne 1) till acceptorn (färgämne 2) när givargruppen är upphetsad. I allmänhet överlappar emissionsspektrumet för givarfluoroforgruppen med absorptionsspektrumet för acceptorgruppen. "När avståndet mellan de två fluoroforerna är lämpligt (10 - 100 A) kan överföringen av fluoroforenergi från givaren till acceptorn observeras." Metoden för energiöverföring beror på receptorns kemiska struktur:
1. Omvandlas till molekylvibration, det vill säga det lysande ljuset av energiöverföring försvinner. (Receptorn är en lätt släckare)
2. Emissionen är mer intensiv än själva receptorn, vilket resulterar i en rödskift i det sekundära fluorescensspektrumet. ” (Receptorer är lysande emitterare).
Givargruppen (EDANS) och Acceptorgen (DABCYL) är enhetligt kopplade till det naturliga underlaget för HIV -proteas, och när substratet inte är frånkopplat kan Dabcyl Quenle Edans och sedan bli inte upptäckbar till fluor. Vid avkoppling av HIV-1-proteas släcks EDANS inte längre av DABCYL, och EDANS Luciferaser kan därefter detekteras. Tillgängligheten av proteashämmare kan övervakas genom förändringar i fluorescensintensiteten hos EDAN.
FRET -peptider är praktiska verktyg för att studera peptidas -nonspecificitet. Eftersom dess reaktionsprocess kontinuerligt kan övervakas ger den en bekväm metod för att upptäcka enzymaktivitet. Sheen som produceras efter hydrolysen av peptidbindningar av givaren/acceptorn ger ett mått på enzymaktivitet vid nanomolära koncentrationer. När FRET -peptiden är intakt visar den ett plötsligt försvinnande av den inre blixt, men när någon peptidbindning mittemot givaren/acceptoren bryts, släpper den en blixt, som kan detekteras kontinuerligt och enzymaktiviteten kan sedan kvantifieras.
Posttid: 2025-07-02