Fluorescensresonansenergiöverföring (FRET)
Fluorescensresonansenergiöverföring (FRET) är en icke-strålningsenergiöverföringsprocess i vilken donatorns exciterade tillståndsenergi överförs till det exciterade acceptortillståndet genom växelverkan mellan intermolekylära elektriska par.Denna process involverar inte fotoner och är därför icke-strålande.Denna analys har fördelarna av att vara snabb, känslig och enkel.
Färgämnet som används i FRET-analysen kan vara identiskt.Men i de flesta applikationer används faktiskt olika färgämnen.I korthet är överföringen av ljusresonansenergi överföringen av ett par dipoler från donatorn (färgämne 1) till acceptorn (färgämne 2) när donatorgruppen exciteras.I allmänhet överlappar emissionsspektrumet för donatorfluoroforgruppen med absorptionsspektrumet för Acceptorgruppen."När avståndet mellan de två fluoroforerna är lämpligt (10 - 100 A), kan överföringen av fluoroforenergi från donatorn till acceptorn observeras."Metoden för energiöverföring beror på receptorns kemiska struktur:
1. Omvandlas till molekylär vibration, det vill säga det lysande ljuset från energiöverföring försvinner.(Receptorn är en ljussläckare)
2. Emissionen är mer intensiv än själva receptorn, vilket resulterar i en rödförskjutning i det sekundära fluorescensspektrumet.”(Receptorer är ljussändare).
Givargruppen (EDANS) och acceptorgenen (DABCYL) är likformigt kopplade till det naturliga substratet av HIV-proteas, och när substratet inte kopplas bort kan DABCYL dämpa EDANS och sedan bli odetekterbart för fluor.Vid urkoppling av HIV-1-proteas släcks EDANS inte längre av DABCYL, och EDANS-luciferaser kan därefter detekteras.Tillgängligheten av proteashämmare kan övervakas genom förändringar i fluorescensintensiteten hos EDANS.
FRET-peptider är bekväma verktyg för att studera peptidas-ickespecificitet.Eftersom dess reaktionsprocess kan övervakas kontinuerligt, tillhandahåller den en bekväm metod för att detektera enzymaktivitet.Glansen som produceras efter hydrolysen av peptidbindningar av donatorn/acceptorn ger ett mått på enzymaktivitet vid nanomolära koncentrationer.När FRET-peptiden är intakt visar den ett plötsligt försvinnande av den interna blixten, men när någon peptidbindning mittemot donatorn/acceptorn går sönder, släpper den en blixt, som kan detekteras kontinuerligt och enzymaktiviteten kan sedan kvantifieras.
Posttid: 2023-aug-14