Som ett instrument med hög precision kan HPLC lätt leda till några besvärliga små problem om det inte drivs på rätt sätt under användning. Ett av de vanligaste problemen är kolumnkomprimeringsproblemet. Hur man snabbt felsöker en felaktig kromatograf. HPLC -systemet består huvudsakligen av en reservoarflaska, en pump, en injektor, en kolonn, en kolonntemperaturkammare, en detektor och ett databehandlingssystem. För hela systemet är pelarna, pumpar och detektorer de viktigaste komponenterna och de viktigaste platserna som är benägna att problem.
Nyckeln till kolonntryck är området som behöver nära uppmärksamhet när du använder HPLC. Stabiliteten i kolonntrycket är nära besläktad med kromatografisk toppform, kolonneffektivitet, separationseffektivitet och retentionstid. Kolonntrycksstabilitet betyder inte att tryckvärdet är stabilt till ett stabilt värde, utan snarare att tryckfluktuationsområdet är mellan 345 kPa eller 50psi (vilket möjliggör användning av gradienteluering när kolonntrycket är stabilt och långsamt förändras). För högt eller för lågt tryck är ett kolonntrycksproblem.
De mest benägna att HPLC -fel och lösningar
1, högt tryck är det vanligaste problemet i användningen av HPLC. Detta innebär en plötslig ökning av pressen. I allmänhet finns det följande skäl: (1) I allmänhet beror detta på flödeskanalblockering. Vid denna tidpunkt bör vi undersöka det bitvis. a. Skär först vakuumpumpens inlopp. Vid denna tidpunkt fylldes kikröret med vätska så att kikröret var mindre än lösningsmedelsflaskan för att se om vätskan droppade efter vilja. Om vätskan inte droppar eller droppar långsamt, blockeras lösningsmedelsfilterhuvudet. Behandling: Blötlägg i 30% salpetersyra under en halvtimme och skölj med ultrapure vatten. Om vätskan droppar slumpmässigt är lösningsmedelsfilterhuvudet normalt och kontrolleras; b. Öppna rensningsventilen så att den mobila fasen inte passerar genom kolonnen, och om trycket inte är signifikant reducerat blockeras filtervitt huvudet. Behandling: filtrerade whiteheads avlägsnades och sonikerades med 10% isopropanol under en halvtimme. Förutsatt att trycket sjunker under 100psi är det filtrerade vita huvudet normalt och kontrolleras; c. Ta bort kolumnens utgång, om trycket inte minskar är kolumnen blockerad. Behandling: Om det är en buffert saltblockering, skölj 95% tills trycket är normalt. Om hinder orsakas av något mer högt bevarat material, bör ett starkare flöde än den nuvarande mobila fasen användas för att rusa mot normalt tryck. Om det långsiktiga rengöringstrycket inte minskar enligt ovanstående metod kan inloppet och utloppet av kolonnen anses vara ansluten till instrumentet tvärtom, och kolumnen kan rengöras med den mobila fasen. För närvarande, om kolonntrycket fortfarande inte reduceras, kan kolonnens ingångssiktplatta endast bytas ut, men när operationen inte är bra är det lätt att leda till minskningen av kolonneffekten, så försök att använda mindre. För svåra problem kan kolumnersättning övervägas.
(2) Inställning av felaktig flödeshastighet: Korrekt flödeshastighet kan återställas.
(3) Felaktigt flödesförhållande: Viskositetsindexet för olika andelar av flöden är olika, och motsvarande systemtryck för flödet med högre viskositet är också större. Om möjligt kan lägre viskositetslösningsmedel bytas ut eller återinställas och beredas.
(4) Systemtryck Nolldrift: Justera noll på vätskenivåsensorn.
2 är trycket för lågt (1) orsakas vanligtvis av systemläckage. Vad du ska göra: Hitta varje anslutning, särskilt gränssnittet i båda ändarna av kolumnen och dra åt läckområdet. Ta bort inlägget och dra åt eller linje PTFE -filmen med lämplig kraft.
(2) Gasen kommer in i pumpen, men trycket är vanligtvis instabilt vid denna tidpunkt, högt och lågt. Mer allvarligt kommer pumpen inte att kunna absorbera vätskan. Behandlingsmetod: Öppna rengöringsventilen och rengör med en flödeshastighet av 3 ~ 5 ml/min. Om inte, sugs luftbubblor vid avgasventilen med användning av ett dedikerat nålrör.
(3) Inget mobilfasutflöde: Kontrollera om det finns en mobil fas i reservoarflaskan, om diskbänken är nedsänkt i den mobila fasen och om pumpen körs.
(4) Referensventilen är inte stängd: referensventilen är stängd efter retardation. Det går vanligtvis ner till 0,1. ~ 0,2 ml/ min efter stängning av referensventilen.
Sammanfattning:
I detta dokument analyseras endast vanliga problem i vätskekromatografi. Naturligtvis kommer vi i vår praktiska tillämpning att stöta på fler andra problem. Vid felhantering bör vi följa följande principer: Ändra endast en faktor åt gången för att bestämma förhållandet mellan den hypotetiska faktorn och problemet; I allmänhet, när vi ersätter delar för felsökning, bör vi vara uppmärksamma på att sätta de demonterade intakta delarna tillbaka på plats för att förhindra avfall; Att bilda en bra rekordvanor är nyckeln till framgången för felhantering. Sammanfattningsvis, när du använder HPLC, är det viktigt att uppmärksamma provförbehandling och korrekt drift och underhåll av utrustningen.
Posttid: 2025-07-02