Som ett högprecisionsinstrument kan HPLC lätt leda till några besvärliga små problem om det inte manövreras på rätt sätt under användning.Ett av de vanligaste problemen är problemet med kolumnkomprimering.Hur man snabbt felsöker en felaktig kromatograf.HPLC-systemet består huvudsakligen av en reservoarflaska, en pump, en injektor, en kolonn, en kolonntemperaturkammare, en detektor och ett databehandlingssystem.För hela systemet är pelarna, pumparna och detektorerna nyckelkomponenterna och de huvudsakliga platserna som är utsatta för problem.
Nyckeln till kolonntrycket är det område som behöver noggrann uppmärksamhet vid användning av HPLC.Kolonntryckets stabilitet är nära relaterad till kromatografisk toppform, kolonneffektivitet, separationseffektivitet och retentionstid.Kolonntryckstabilitet betyder inte att tryckvärdet är stabilt vid ett stabilt värde, utan snarare att tryckfluktuationsområdet är mellan 345kPa eller 50PSI (vilket tillåter användning av gradienteluering när kolonntrycket är stabilt och långsamt förändras).För högt eller för lågt tryck är ett kolonntrycksproblem.
De mest utsatta för HPLC-fel och lösningar
1 är högt tryck det vanligaste problemet vid användning av HPLC.Detta innebär en plötslig ökning av trycket.I allmänhet finns det följande skäl: (1) I allmänhet beror detta på blockering av flödeskanaler.Vid det här laget bör vi undersöka det bitvis.a.Klipp först av inloppet på vakuumpumpen.Vid denna tidpunkt fylldes PEEK-röret med vätska så att PEEK-röret var mindre än lösningsmedelsflaskan för att se om vätskan droppade efter behag.Om vätskan inte droppar eller droppar långsamt är lösningsmedelsfilterhuvudet blockerat.Behandling: Blötlägg i 30% salpetersyra i en halvtimme och skölj med ultrarent vatten.Om vätskan droppar slumpmässigt är lösningsmedelsfilterhuvudet normalt och kontrolleras;b.Öppna spolningsventilen så att den mobila fasen inte passerar genom kolonnen, och om trycket inte reduceras avsevärt, blockeras det vita filterhuvudet.Behandling: Filtrerade whiteheads avlägsnades och sonikerades med 10% isopropanol under en halvtimme.Förutsatt att trycket faller under 100PSI är det filtrerade vita huvudet normalt och kontrolleras;c.Ta bort utgångsänden på kolonnen, om trycket inte minskar är kolonnen blockerad.Behandling: Om det är en buffertsaltblockering, skölj 95 % tills trycket är normalt.Om hindret orsakas av något mer högkonserverat material, bör ett starkare flöde än den nuvarande mobila fasen användas för att rusa mot normalt tryck.Om det långvariga rengöringstrycket inte minskar enligt ovanstående metod, kan kolonnens inlopp och utlopp tvärtom anses vara anslutna till instrumentet, och kolonnen kan rengöras med den mobila fasen.Vid denna tidpunkt, om kolonntrycket fortfarande inte minskar, kan kolonnens ingångssiktplatta endast bytas ut, men när driften inte är bra är det lätt att leda till minskning av kolonneffekten, så försök att använda mindre.Vid svåra problem kan kolonnbyte övervägas.
(2) Felaktig flödesinställning: Korrekt flöde kan återställas.
(3) Felaktigt flödesförhållande: viskositetsindexet för olika proportioner av flöden är olika, och motsvarande systemtryck för flödet med högre viskositet är också större.Om möjligt kan lösningsmedel med lägre viskositet bytas ut eller återställas och förberedas.
(4) Systemtryckets nolldrift: justera nollpunkten för vätskenivåsensorn.
2, trycket är för lågt (1) orsakas vanligtvis av systemläckage.Vad du ska göra: Hitta varje anslutning, särskilt gränssnittet i båda ändarna av kolonnen, och dra åt läckageområdet.Ta bort stolpen och dra åt eller fodra PTFE-filmen med lämplig kraft.
(2) Gasen kommer in i pumpen, men trycket är vanligtvis instabilt vid denna tidpunkt, högt och lågt.Mer allvarligt, pumpen kommer inte att kunna absorbera vätskan.Behandlingsmetod: öppna rengöringsventilen och rengör med en flödeshastighet på 3~5ml/min.Om inte, aspirerades luftbubblor vid avgasventilen med hjälp av ett särskilt nålrör.
(3) Inget utflöde av mobil fas: kontrollera om det finns en mobil fas i reservoarflaskan, om diskhon är nedsänkt i den mobila fasen och om pumpen är igång.
(4) Referensventilen är inte stängd: referensventilen stängs efter retardation.Det brukar gå ner till 0,1.~ 0,2mL/min efter stängning av referensventilen.
Sammanfattning:
I denna artikel analyseras endast vanliga problem inom vätskekromatografi.Naturligtvis kommer vi att stöta på fler andra problem i vår praktiska tillämpning.Vid felhantering bör vi följa följande principer: ändra endast en faktor i taget för att fastställa förhållandet mellan den hypotetiska faktorn och problemet;I allmänhet, när vi byter ut delar för felsökning, bör vi vara uppmärksamma på att sätta de demonterade intakta delarna på plats igen för att förhindra avfall;Att skapa en god journalvana är nyckeln till framgång med felhantering.Sammanfattningsvis, när du använder HPLC är det viktigt att vara uppmärksam på provförbehandling och korrekt drift och underhåll av utrustningen.
Posttid: 2023-09-18