Bakgrund
Melanotan I, även känd som Afamelanotid, är en linjär polypeptid som består av 13 aminosyror som är redo att spela en allt viktigare roll i läkemedelsforskning. De primära engelska namnen för Melanotan I är Melanotan-1 och Afamelanotide. Som en syntetisk analog av α-melanocytstimulerande hormon α-MSH) kan Melanotan I användas för att behandla ljuskänslighetsrubbningar orsakade av erytropoetisk protoporfyri. För närvarande är de flesta Melanotan I-produkter märkta endast för forskningsanvändning och är ännu inte avsedda för mänsklig användning. I traditionell fastfassyntes påverkar valet av harts avsevärt kopplingseffektiviteten och produktens slutliga renhet.
Grundläggande information
Kinesiskt namn: Melanotan 1
Engelskt namn: Melanotan-1
Företagsnummer: GT-A006
CAS-nr: 75921-69-6
Sekvens: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Molekylformel: C78H111N21O19
Molekylvikt: 1646,88
Beredningsmetod
jag. Framställning av Fmoc-Val-Amino Resin
Steg 1:Väg upp 11,11 g (5 mmol) Ramage Amide AM-harts med en substitutionsgrad på 0,45 mmol/g och tillsätt det till en fastfasreaktor. Tillsätt DCM för att svälla hartset i 30 minuter, låt sedan rinna av. Tvätta tre gånger med DMF. Tillsätt en DMF-lösning innehållande 20 % piperidin (v/v) och reagera i 5 minuter. Tillsätt ytterligare 20 % piperidin DMF-lösning och reagera i 10 minuter, med en DMF-tvätt emellan. Efter att reaktionen är klar, dränera och tvätta tre gånger med DMF.
Steg 2:Lös 5,09 g Fmoc-Val-OH, 2,02 g HOBT (1-hydroxibensotriazol) och 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropylkarbodiimid) i DMF vid 0°C. Efter fullständig upplösning, tillsätt blandningen till reaktionskolonnen och reagera vid rumstemperatur i 1 timme. Övervaka reaktionsförloppet med hjälp av ninhydrintestet, vilket säkerställer ett negativt resultat. Efter att reaktionen är klar, tvätta tre gånger med DMF för att erhålla Fmoc-Val-aminoharts.
II. Beredning av helt skyddad hartspeptid av Melanotan I.
Steg 1:Tillsätt 20% piperidin i DMF-lösning (volymförhållande) till ovanstående Fmoc-Val-aminoresin. Reagera i 5 minuter, tillsätt sedan ytterligare en portion av 20 % piperidin i DMF-lösning och reagera i 10 minuter. Tvätta en gång med DMF under intervallet. Efter att reaktionen är avslutad, torka under vakuum och tvätta tre gånger med DMF.
Steg 2:Lös 5,06 g Fmoc-Pro-OH, 2,02 g HOBT (1-hydroxibensotriazol) och 2,32 ml DIC (N,N'-diisopropylkarbodiimid) i DMF vid 0°C. Efter fullständig upplösning, tillsätt blandningen till reaktionskolonnen och reagera vid rumstemperatur i 1 timme. Övervaka reaktionsförloppet med hjälp av ninhydrintestet (Kaiser-testet) tills negativa resultat erhålls. Efter avslutad tvätt, tvätta tre gånger med DMF för att erhålla Fmoc-Pro-Val-aminoresin.
Steg 3:Följ metoden som beskrivs i steg 2, koppla sekventiellt varje aminosyra enligt sekvensen för Melanotan I. Efter avslutad Ac-Ser(tBu)-OH-kopplingsreaktion, tvätta tre gånger med DMF, tre gånger med DCM (diklormetan) och tre gånger med metanol. Torka under vakuum för att erhålla 23,89 g helt skyddad Melanotan I-hartsbunden peptid.
III. Framställning av Melanotan I råpeptid
23,89 g fullständigt skyddad Melanotan I-hartsbunden peptid placerades i en rundbottnad kolv. Vid 0°C tillsattes långsamt 250 ml av en förberedd klyvningscocktail (sammansatt av TFA:tioanisol:fenol:triisopropylsilan:vatten = 82,5:7,5:5:3:2 i volym) under omrörning. Blandningen fick reagera vid låg temperatur under 0,5 timmar, följt av reaktion vid rumstemperatur under 2 timmar. Klyvningslösningen filtrerades sedan under vakuum. Denna lösning sattes långsamt till 2 1 iskall vattenfri dietyleter under omröring. Den råa peptiden isolerades genom filtrering, tvättades tre gånger med iskall dietyleter och 8,55 g av Melanotan I rå peptid erhölls.
IV. Framställning av Melanotan I renad peptid
Steg 1:Lös upp den råa Melanotan I-peptiden i 100 ml renat vatten och filtrera genom ett 0,45 μm membran för att erhålla en rå peptidlösning.
Steg 2:Rena den råa Melanotan I-peptiden med högpresterande vätskekromatografi (HPLC). Använd en DAC-HB50 dynamisk axiell kompressionskolonn med mobil fas A (0,05 % trifluorättiksyra vattenlösning) och mobil fas B (0,05 % trifluorättiksyra i acetonitril). Utför gradienteluering för separation och rening. Detektera provet med hjälp av en UV-detektor och samla upp peptidlösningen som motsvarar måltoppen i fraktioner.
Steg 3:Efter HPLC-rening, erhåll 180 ml Melanotan I-trifluoracetatlösning med en renhet som överstiger 99 %. Koncentrera lösningen till 50 ml via rotationsindunstning.
Steg 4:Utjämna kromatografikolonnen med avjoniserat vatten och ladda 50 ml av den renade Melanotan I-trifluoracetatlösningen (renhet >99%). Eluera i 50 minuter i ett vattenlösningssystem med 2 % ättiksyra. Koncentrera den uppsamlade målprodukten till 80 ml via rotationsindunstning. Utför förfrystorkning och frystorkning för att slutligen få 5,33 g av Melanotan I renad peptid, med ett utbyte på 32,33 %.
Posttid: 2026-01-05