Några frågor och svar om lösligheten hos modifierade peptider

1. Vilka föroreningar finns det i de icke-HPLC-renade?

S: Modifierad peptid och icke-modifierad peptidföroreningar i rå och desaltad modifierad peptid: såsom icke-full längd modifierad peptid och vissa råvaror såsom DTT, TFA, etc.

2. Vilka föroreningar renas av HPLC?

S: Den modifierade peptiden renad av HPLC kommer fortfarande att ha många föroreningar, och föroreningarna är vanligtvis korta peptider och lite TFA.

3. Hur lång är det lämpligt?

S: Syntesen av modifierad peptid måste beakta längden på den modifierade peptiden, laddningen, hydrofiliciteten och hydrofobiciteten och andra faktorer. Ju längre den totala längden, desto lägre renhet och utbyte av råprodukten, och desto högre är svårigheten att rena och sannolikheten för svårigheter i syntesen. Det finns emellertid inget sätt att ändra sekvensen för den funktionella domänen för den modifierade peptiden, men för att slutföra syntesen av den modifierade peptiden kan ibland bara en del extra aminosyror tillsättas i uppströms och nedströms den funktionella domänen för att förbättra lösligheten och hydrofobiciteten hos de modifierade peptiden. Om den modifierade peptiden är för kort kan det finnas problem i syntesen. Det första problemet är att den syntetiserade modifierade peptiden har vissa svårigheter i efterbehandlingsprocessen. Den modifierade peptiden inom 5 peptider har vanligtvis hydrofoba aminosyror, annars är efterbehandlingen svår. Modifierade peptider under 15 aminosyrarester kan i allmänhet erhållas med tillfredsställande utbyte och utbyte.

Några frågor och svar om lösligheten hos modifierade peptider

4. Hur man bedömer lösligheten för den modifierade peptiden från sekvensen?

(1) Den modifierade peptiden som innehåller en hög andel hydrofoba aminosyror såsom Leu, Val, IIE, Met, Phe och TRP är inte lätt löslig i vattenlösning eller nästan olöslig. Denna aminosyra kan vara problematisk antingen vid rening eller syntes.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Varför är det svårt att syntetisera Cys, MET eller TRP?

S: Modifierade peptider som innehåller Cys, MET eller TRP kan inte syntetiseras och produkter med hög renhet är svåra att erhålla. Detta beror främst på att dessa grupper är mindre stabila och benägna att oxidation. Användning och lagring av dessa modifierade peptider kräver särskild vård för att förhindra upprepad öppning av locket.

6, varför kommer någon syntetisk utbyte eller renhet att vara mycket låg?

S: Det finns en betydande skillnad mellan syntesen av modifierade peptider och syntesen av primrar. Det finns väldigt få primrar som inte kan syntetiseras, men det finns ofta modifierade peptider som inte kan syntetiseras. Såsom Val, Ile, Tyr och TRP, Leu, Phe, GLN och THR Aminosyra nära eller slinga, modifierade peptider kan inte sträcka sig upplöst i syntesprocessen, syntetisk effektivitet är lägre. Synteseffektiviteten och produktens renhet är mycket låg i följande fall, till exempel: Repeat Pro, Ser-Ser, Repeat ASP, Four på varandra följande Gly, etc.

7. Hur renas det?

S: Modifierade peptider renas vanligtvis genom omvänd fas-kolonn (såsom C8, C18, etc.) vid 214Nm. Buffertsystemet är i allmänhet en lösning som innehåller TFA, pH2.0. Buffera innehöll 0,1%TFainddH2O, och buffertB innehöll 1%TFA/ACN/pH2.0. Det löstes i buffera före rening; Om lösningen inte är tillfredsställande, lös med buffertb, späd sedan ut med buffera; För mycket hydrofoba modifierade peptider tillsätts ibland lite formisida eller ättiksyra.