Rekombinanta proteinantigener har ofta flera olika epitoper, av vilka några är sekvensepitoper och vissa är strukturella epitoper. Polyklonala antikroppar erhållna genom immunisering av djur med denaturerade antigen är blandningar av antikroppar som är specifika för enskilda epitoper och kan användas i allmänhet för att upptäcka naturliga strukturer eller denaturerade målproteiner. En sidofördel med att använda denaturerade proteiner som immunogener är att denaturerade proteiner tenderar att vara mer immunogena och kan stimulera ett starkt immunsvar hos djur.
Uttryckssystemet i Escherichia coli väljs vanligtvis för antigena ändamål eftersom det är det dyraste systemet när det gäller tid och pengar. För att förbättra möjligheten för målproteinuttrycket och bekvämligheten med rening uttrycks ibland bara ett litet fragment av målproteinet, såsom en specifik domän.
Proteins tredimensionella struktur
Den specifika domänen för ett protein
Om syftet med antikroppsberedning enbart är för WB-detektion, är det ekonomiskt och snabbt att använda syntetisk liten peptid som antigen, men det finns en risk för svag immunogenicitet eller icke-regenicitet på grund av olämpligt urval av peptidsegment. Eftersom antikroppsberedning kräver en lång period väljs ofta två eller tre olika peptidsegment för att framställa antikroppar med användning av polypeptidantigen för att säkerställa framgångshastigheten för experimentet.
Renheten hos polypeptidantigen för immunisering krävs för att vara större än 80%. Även om en högre renhet teoretiskt kan erhålla antikroppar med bättre specificitet, producerar djur i praktiken alltid ett stort antal icke-specifika antikroppar och därmed maskerar fördelarna med antigenrenhet.
Dessutom måste framställningen av antikroppar från små peptider tvärbundas till lämpligt bärarantigen för att förbättra dess immunogenicitet. Två vanliga antigenbärare är KLH och BSA.
Posttid: 2025-07-03