Efter kemisk syntes av peptider med fastfas FMOC finns det många klyvningsmetoder, och två grundtyper introduceras nu som vi vanligtvis använder.
1. Stark syrametod (TFA)
Det torra hartset placerades i en skakkolv och en lämplig mängd rensare innehållande tillsattes. (Scavengers) Trifluorättiksyrans skärande reagens (TFA), 10-25 ml/g harts, täckt och skakade intermittent vid rumstemperatur med rotation. Hartsen tömdes, tvättades 2-3 gånger med ny TFA, filtratet kombinerades och 8-10 gånger var volymen isdietyleter tappad. Ibland kan en del TFA ångas för att erhålla råa peptid fällningar. Ether kan användas för att öka nederbördseffektiviteten genom isassisterad kylning. Slutligen uppsamlades den utfällda råpeptidprodukten.
Lämplig harts: Wang harts eller rink amidharts
2, svag syremetod (TFA eller ättiksyrautspädning) 1% TFA:
1 g harts innehållande peptider tillsattes till en glasskakkolv av diklormetanlösning innehållande 1%TFA, förseglades och skakades under 2 minuter. Filtratet pressades med kväve in i en annan ny metanolskakkolv innehållande 10% pyridin, och proceduren upprepades 10 gånger. De skyddande peptiderna som var kvar på hartset tvättades tre gånger med användning av 30 ml DCM och 30 ml MeOH. Rester kontrollerades och rengjordes av TLC eller HPLC. Alla filtrat kombinerades och 5% av lösningsmedlet tillagades under reducerat tryck. Fyrtio ml vatten tillsattes och nederbörd hjälpte till med kylblandningen. Efter filtrering tvättades produkten tre gånger med rent vatten, placerades i en vakuumtorkning av ugnen och torkades med KOH eller P2O5.
Utspädda ättiksyra:
Peptider hängde på hartset behandlades med skärningslösning under 2 timmar med användning av ACOH // TFE/DCM (2: 2: 6), hartset filtrerades och hartset tvättades tre gånger med skärningslösning. Överskottet av ättiksyran avlägsnades genom tillsats av 15-faldig n-hexan till det blandade filtratet och roterande brant.
Appliceringsharts: 2-CTC-harts
Inläggstid: 2025-07-01