Proteinrening är processen för att separera proteinfraktioner av ett specifikt syfte från vävnader, celler eller proteinblandningar. Proteinrening bör inte bara främja en stark renhet av det isolerade proteinet, utan också upprätthålla proteinets biologiska aktivitet. Därför är det nödvändigt att utforma ett eller flera kombinationsscheman enligt olika proteinegenskaper. Huvudstrategin för proteinrening är att utnyttja likheterna och skillnaderna mellan olika proteiner. På grundval av likheten mellan proteiner kan icke-proteinmaterial avlägsnas, och sedan kan målproteinet separeras baserat på proteinskillnaderna. Speciellt med den snabba utvecklingen av genteknisk teknik, även om många proteiner uttrycks genom genetisk rekombination, är nivån av proteinrening direkt relaterad till proteinets renhet och aktivitet. Därför är proteinrening ett viktigt ämne i modern bioteknik.
Mål
Å ena sidan är isolering och rening av proteiner särskilt viktiga för en djupgående studie av proteinernas struktur och funktion, och å andra sidan är separering och rening av proteiner också direkt relaterade till appliceringseffekten av proteiner. Därför spelar proteinrening en viktig roll i forskning och tillämpning av biologisk vetenskap, och proteinseparation och reningsteknik är också en nyckelteknologi inom den biologiska industrin.
Vägen
Principen för proteinrening är att separera målproteinet med rimlig effektivitet, hastighet, utbyte och renhet samtidigt som dess biologiska aktivitet och kemiska integritet bibehålls. De viktigaste stegen inkluderar val av experimentella material, förbehandling, proteinekstraktion, råproteinklassificering, finproteinklassificering och proteinidentifiering.
Renningsprocessen måste uppmärksamma: 1 för att minimera påverkan på proteinaktivitet, till exempel att förhindra för högt eller för lågt pH, hög temperatur och tungmetalleffekter; 2. Använd vid låg temperatur; 3. Försök att hålla den ledande nivån på proteininnehåll i provet.
Klassificering av
Proteinrening kan klassificeras enligt typen av reningsmetod:
I. Utfällningsmetod, inklusive saltavlagring, användning av saltjoner för att förstöra det stelnade skiktet på proteinets yta, avslöja det hydrofoba området och sedan avsättning för att uppnå syftet med preliminär rening; Organisk avsättning, med organiska lösningsmedel för att minska vattenaktiviteten, förstör den koagulerade filmen på proteinytan, vilket leder till proteinutfällning. Utfällning är en mild reningsmetod, men renheten är inte hög och kan användas som en primär reningsprocess.
Två, dialysmetod, inklusive dialyspåse och ultrafiltreringsmetod. Genom dialys och ultrafiltrering kan små molekylära föroreningar elimineras och proteinlösningen kan också ersättas.
3. Kromatografiska metoder inkluderar molekylsiktgel kromatografi, jonbytar kromatografi, affinitetskromatografi (metallkelating affinitetskromatografi, protein A/G -kromatografi, receptorprotein, substrat, etc.), hydrofob kromatografi, omvänd kromatografi och högpresterande vätskekromatografi. För att uppnå bättre resultat krävs ofta en kombination av två kromatografiska metoder, såsom affinitetskromatografi och jonbytekromatografi.
Utöver ovanstående metoder finns det många andra reningsmetoder, såsom densitetsgradientcentrifugering, som är lämpliga för produktion av proteiner med hög renhet, men kräver högre experimentella förhållanden. Proteinkristaller är lämpliga för biologisk strukturanalys, såsom X-överföring.
Inläggstid: 2025-07-01